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內切酶作用及識別序列結構情況概述

發(fā)布時間: 2020-04-13  點擊次數: 2175次
   內切酶一般從微生物中獲取,限制性核酸內切酶的作用實際就是限制酶降解外源DNA,維護宿主遺傳穩(wěn)定的保護機制。自身DNA沒有被分解的原因是通過自身DNA甲基化,甲基化是常見的修飾作用,可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護,即讓它們在甲基轉移酶的作用下,與甲基發(fā)生共價結合。通過甲基化作用達到識別自身遺傳物質和外來遺傳物質的目的。
  限制性核酸內切酶識別序列的結構情況:
  根據限制酶的結構,輔因子的需求切位與作用方式,可將限制酶分為三種類型,分別是第①型(Type I)、第②型(TypeⅡ)及第③型(TypeⅢ)。
  Type I:
  同時具有修飾及識別切割的作用;另有識別DNA上特定堿基序列的能力,通常其切割位距離識別位可達數千個堿基之遠。
  TypeⅡ:
  Ⅱ類中的限制性內切酶在分子克隆中得到了廣泛應用,它們是重組DNA的基礎。
  只具有識別切割的作用,修飾作用由其他酶進行。所識別的位置多為短的回文序列;所剪切的堿基序列通常即為所識別的序列。是遺傳工程上,實用性較高的限制酶種類。
  Ⅱ類酶切割位點在識別序列中,有的在對稱軸處切割,產生平末端的DNA片段;有的切割位點在對稱軸一側,產生帶有單鏈突出末端的DNA片段稱粘性末端,如EcoRⅠ切割識別序列后產生兩個互補的粘性末端。
  TypeⅢ:
  與一型限制酶類似,同時具有修飾及識別切割的作用??勺R別短的不對稱序列,切割位與識別序列約距24-26個堿基對。
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